凍干熒光PCR試劑凍干方法是將熒光PCR試劑經(jīng)過預(yù)凍,在真空狀態(tài)下進(jìn)行升華,后可制備成凍干粉。凍干熒光PCR試劑時(shí),選用的反應(yīng)管在做凍干時(shí)有許多不足之處:1.由于反應(yīng)管呈上寬下窄的錐字形,還需要借助其他工具支撐,這樣反應(yīng)管試劑與凍干機(jī)擱板的接觸面積很小,升華時(shí)傳熱會(huì)受到限制,延長了預(yù)凍和升華的時(shí)間,反應(yīng)管中的凍干程序一般在24~30小時(shí),凍干制品日產(chǎn)量很低。2.反應(yīng)管中的凍干,在加入凍干混合試劑后,需要進(jìn)行離心處理,排出氣泡,并將粘附在反應(yīng)管壁上的試劑離心下來。3.反應(yīng)管中的凍干,在凍干結(jié)束后需要關(guān)蓋,或者是開模具做帶豁口的反應(yīng)管(排蓋)或者是凍干結(jié)束后自動(dòng)壓蓋,凍干結(jié)束后將反應(yīng)管取出,在凍干機(jī)外部關(guān)蓋,這種方法對環(huán)境有很高的要求,需要恒溫恒濕,濕度不能超過15%。適合凍干熒光PCR的試劑凍干機(jī)Pilot10-15T應(yīng)用示例:
1.探針、底物、引物原料要求確定。
2.凍干溶液配方開發(fā),采用正交法或響應(yīng)曲面法進(jìn)行輔料篩選。
3.選擇適合的包材和模具。
4.設(shè)計(jì)凍干曲線配合輔料篩選。
5.確定配方及工藝。
6.穩(wěn)定性測試。
7.根據(jù)穩(wěn)定性測試結(jié)果修正工藝或配方。
8.整個(gè)環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。
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